用途原为USP收载用于治疗细菌性胆,肾结石及肝昏迷等症.由于良好的瘤胃微生物脲酶抑制作用,英、美等国于上世纪九十年代初始用于牛、羊等反刍动物营养,以改善瘤胃氨环境,提高蛋白质的转化率,增加粗饲料采食量,降低血液氨浓度,减轻氨应激,增加机体免疫力,收到良好效果.用途作为瘤胃微生物脲酶抑制剂，用于反刍动物饲料添加剂及用途用于尿素酶抑制研究；作为Diels-Alder反应的亲二烯体用于亚硝基羰基甲烷的原位合成

用途在农业上，乙酰氧肟酸可作为脲酶竞争性抑制剂，减缓尿素或降低蛋白质分解为氨的速度，从而提高蛋白质的利用率。在冶金行业，作为很好的有机配位体，可应用于金属矿物组分的提取和分析鉴定。乙酰异羟肟酸的特殊结构，使它在各行业的应用十分广泛。在畜牧业上，乙酰氧肟酸AHA作为一种很好的脲酶竞争抑制剂，一般作为反刍动物饲料添加剂，是一种良好的瘤胃微生物脲酶抑制剂。AHA作为瘤胃微生物脲酶抑制剂，特异性强，能减慢尿素分解速度，提高微生物蛋白合成量，从而提高反刍动物的生产水平,同时节约蛋白质饲料，提高蛋白质的利用率。